Диссертация

Разработанный подход инактивации гена оксидазы D-аминокислот в дрожжах H. Polymorpha использован для получения нокаутных генов DAAO, их генетической и физиологической характеристики, а также для подтверждения субстратной специфичности оксидазы H. polymorpha и изучения конформации белков и флавинов in vitro. Установлено, что использование подложки из коллоидных наночастиц серебра позволяет увеличить чувствительность КР в 105-106. В ходе взаимодействия флавина с субстратом происходит изменение его конформации, сопровождающееся смещением максимума SERS-спектра 1252 см-1 в длинноволновую область. При взаимодействии DAAO с D-аланином изменения конофрмации флавина выявлены в течение более короткого промежутка времени, чем при взаимодействии с D-серином. Методом однофотонного счета обнаружено уменьшение амплитуды флуоресценции триптофана при активации DAAO. С помощью ИК-спектроскопии выявлено изменение вклада полос амида 1 и амида 2 при активации обоих типов DAAO.