Диссертация
Медведева Мария Витальевна
Кандидат наук
Статус диссертации
S-нитрозилирование глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы
Доктор наук Профессор
Шмальгаузен Елена Викторовна
Кандидат наук Доцент
Доктор наук Профессор
Тишков Владимир Иванович
Доктор наук Профессор
Калинина Елена Валентиновна
Доктор наук Профессор
биологические науки
Оксид азота (NO) играет важную роль в регуляции многих процессов, происходящих в живых организмах. Многие аспекты влияния NO на белки остаются недостаточно исследованными из-за нестабильности главного продукта их модификации при S-нитрозилировании сульфгидрильных групп остатков цистеина.
Мы выбрали глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназу (ГАФД) в качестве объекта для изучения модифицирующего действия NO, а также влияния модификаций на свойства белка. ГАФД является ключевым ферментом гликолиза. Одним из важных аспектов изучения ГАФД является её способность подвергаться различным посттрансляционным модификациям, таким как окисление, S-нитрозилирование и S-глутатионилирование.
Целью данной работы было выяснение механизма S-нитрозилирования ГАФД и последствий окислительного и нитрозативного стресса на взаимодействие ГАФД с другими белками.
В рамках данной работы были впервые детектированы формы ГАФД-SNO и ГАФД-SOH после инкубации с донором NO (DEANO) методами ESI и MALDI-TOF-масс-спектрометрии. Продемонстрировано количественное распределение продуктов NO-модификации ГАФД. Было показано, что инкубация ГАФД с DEANO приводит к инактивации фермента вследствие модификации каталитического цистеинового остатка (Cys152).
Была предложена схема образования продуктов модификации ГАФД. Предложенная схема подтверждалась экспериментами на клеточной культуре HEK 293T. Доказано, что S-глутатионилирование менее обратимо по сравнению с S-нитрозилированием, и, следовательно, S-глутатионилированная ГАФД может накапливаться в клетках.
Впервые показана возможность переноса NO-группы с ГАФД-SNO на G-актин in vitro. Методом MALDI-TOF-масс-спектрометрии было идентифицировано, что NO-группа переходит с Cys152 ГАФД на Сys374 актина.
Полученные результаты расширяют теоретические представления о механизмах модификации ГАФД донором NO и дополняют предложенные гипотезы участия нитрозилированной ГАФД в апоптозе.
# | Название | Размер |
---|---|---|
1 | Отзыв научного руководителя (консультанта) | 395 KB |
2 | Диссертация | 5 MB |
3 | Сведения о научных руководителях (консультантах) | 274 KB |
4 | Протокол приема диссертации к защите | 55 KB |
5 | Отзыв второго научного руководителя (консультанта) | 385 KB |
6 | Автореферат | 6 MB |