Диссертация

Цель работы состояла в разработке новых способов обнаружения, групповой ВЭЖХ-МС идентификации и определения сапонинов растительного происхождения с использованием собранной из экспериментальных данных информации о путях фрагментации и других особенностях масс-спектрометрического и хроматографического поведения исследуемых групп соединений и оценке аналитических возможностей разработанных подходов на примере тритерпеновых и стероидных сапонинов. Научная новизна. На примере группы физиологически активных сапонинов женьшеня, солодки, абруса и якорцев изучены процессы формирования масс-спектров электрораспылительной ионизации (ЭРИ). Выявлены характеристичные сигналы, образующие паттерны фрагментации сапогенинов исследованных групп соединений. На основе полученных данных предложен оригинальный способ детектирования в режиме регистрации выделенных ионов, позволяющий проводить скрининговое обнаружение и групповую идентификацию гликозидов в течение одного хроматографического анализа. Выбраны условия разделения 19 тритерпеновых гликозидов в варианте обращенно-фазовой ВЭЖХ на колонке, заполненной сорбентом на основе силикагеля с пентафторфенильными заместителями, которые легли в основу разработанного способа обнаружения и определения сапонинов в объектах, содержащих женьшень. Преимуществами данного ВЭЖХ-МС способа, по сравнению с описанными в литературе, являются высокая селективность разделения гинсенозидов протопанаксатриольного (ППТ) и протопанакасадиольного (ППД) типа, высокая достоверность и чувствительность обнаружения, обусловленные регистрируемыми сигналами выделенных диагностических ионов, а также возможность автоматизации. Проведена проверка разработанного способа на образцах корня женьшеня и продуктах на его основе. Изучен состав гликозидов, входящих в состав женьшеневого чая (улуна), и обнаружено 6 ранее не описанных производных абрусогенина. Идентификация компонентов поведена с помощью ВЭЖХ-МС/МС, ВЭЖХ-МСВР и ЯМР. Групповая идентификация компонентов, проведенная с помощью разработанного подхода, подтверждена при сопоставлении профилей гликозидов в экстрактах из чая и исходного растительного сырья. Предложены не имеющие аналогов способы ВЭЖХ-МС-КАМС анализа растительных экстрактов из женьшеня и якорцев стелющихся, преимуществами которых являются высокая достоверность и селективность, позволяющие идентифицировать определяемые соединения по сигналам в масс-спектре, что значительно надежнее использования относительных времен удерживания в предложенных ранее ВЭЖХ-УФ-КАМС подходах, а также стабильность значений факторов отклика, обусловленная регистрацией одинаковых по значению m/z сигналов фрагментных ионов для референтных и определяемых соединений. Практическая значимость. Разработаны способы определения и групповой ВЭЖХ-МС идентификации физиологически активных компонентов женьшеня, солодки и якорцев стелющихся, входящих в состав большого количества лекарственных средств и пищевых добавок. Предложен подход для быстрого скрининга и обнаружения гликозидов растений, отвечающих за сладкий вкус и аромат продуктов и препаратов на их основе. Предложены способы пробоподготовки образцов растительных материалов и коммерческих продуктов, обеспечивающие эффективное извлечение и очистку фракций, содержащих гликозиды. Получены данные о составе женьшеневого чая (улуна), который находится в свободной продаже по всему миру. Обнаруженные новые соединения в его составе, дальнейшее исследование позволит определить их влияние на организм человека и повысить безопасность этого продукта питания и его аналогов. Разработана стратегия ВЭЖХ-МС-КАМС анализа экстрактов из растительного сырья и продуктов на его основе, которая позволяет многократно снизить затраты на приобретение дорогостоящих стандартных образцов определяемых сапонинов, а также получить данные о содержании их аналогов, стандартные образцы которых в коммерческом доступе отсутствуют.