Диссертация

Ингибиторы ДНК-топоизомераз II получили широкое распространение в химиотерапии опухолей. Однако терапия с применением топоизомеразных ядов имеет побочный эффект: у 1−6 % пациентов в течение 1-3 лет развивается так называемый вторичный лейкоз. Его цитогенетической особенностью являются определенные рекуррентные хромосомные перестройки, формирующиеся в гемопоэтических клетках при ошибочной репарации двуцепочечных разрывов, возникающих под действием топоизомеразных ядов. Набор этих транслокаций ограничен — перестраивается либо ген AML1 (RUNX1), либо ген MLL (KMT2A), каждый с одним из нескольких генов-партнеров. Для изучения факторов, влияющих на возникновение именно таких транслокаций, было изучено, как обработка этопозидом влияет на ген AML1 и его локализацию относительно хромосомной территории. Также был проведен 4С-анализ пространственных контактов генов MLL и AML1 со всеми участками генома в клетках до и после обработки этопозидом. Сложность изучения механизмов образования транслокаций как на животных, так и на клетках, подвергнутых воздействию этопозида, обуславливает необходимость моделирования транслокаций, характерных для вторичных лейкозов. В рамках работы была создана клеточная линия, в геном которой встроена индуцируемая доксициклином система CRISPR/Cas, образующая транслокацию AML1-ETO, количественно определяемую методом ПЦР. Исходя из результатов работы был сделан вывод, что ассоциированные с вторичными лейкозами транслокации определяются не взаимным расположением генов-партнеров, а их чувствительностью к топоизомеразным ядам. С помощью полученной клеточной линии показано, что присутствие метотрексата или ингибитора DNA-PKcs NU7026 приводит к повышению частоты формирования транслокаций AML1-ETO. Полученная клеточная линия может применяться как тест-система для анализа различных соединений на предмет риска возникновения лейкозогенных транслокаций.