Warning: Undefined property: Dissovet\Models\Dissertation::$performed_in_place2 in /var/www/application/Models/Dissertation.php on line 354
Диссертация

Диссертация

Махотенко Антонида Викторовна

Кандидат наук

Статус диссертации

09.04.2021 
Диплом Кандидат наук
29.03.2021 
Решение о выдаче диплома
19.03.2021 
Положительное заключение АК
19.01.2021 
На рассмотрении в АК
19.11.2020 
Положительная защита
17.10.2020 
Объявление опубликовано
08.10.2020 
Принят к защите
05.10.2020 
Заключение комиссии
02.10.2020 
Документы приняты
ФИО соискателя
Махотенко Антонида Викторовна
Степень на присвоение
Кандидат наук
Приказ о выдаче диплома
№ 298 от 09.04.2021
Дата и время защиты
19.11.2020 15:30
Научный руководитель
Калинина Наталья Олеговна
Доктор наук Профессор
Оппоненты
Завриев Сергей Кириакович
Доктор наук Профессор
Дорохов Юрий Леонидович
Доктор наук Профессор
Прасолов Владимир Сергеевич
Доктор наук Профессор
Место выполнения работы
Московский государственный университет имени М.В.Ломоносова, Научно-исследовательский институт физико-химической биологии им. А.Н.Белозерского, Отдел биохимии вирусов растений
Специальность
03.01.03 Молекулярная биология
биологические науки
Диссертационный совет
Телефон совета
+7 495 939-33-60

Прямая трансляция защиты: http://www.bio.msu.ru/dissertations/view.php?ID=974 Цель работы: Исследование роли ядерных белков, коилина и фибрилларина, в защитном ответе растений на заражение вирусом погремковости табака (ВПТ, род Tobravirus) и Y вирусом картофеля (YВК, род Potyvirus). Задачи: -Изучение взаимодействия коилина и белка 16К ВПТ и его роли в активации защитного ответа, опосредованного салициловой кислотой (СК). -Изучение характера интерактивных ответов контрастных по отношению к стрессам различной природы растений картофеля. -Исследование роли СК в защитном ответе растений картофеля на инфекцию YВК -Анализ молекулярных ответов трансгенных растений картофеля с гиперэкспрессией и растений с пониженным уровнем экспрессии коилина и фибрилларина на вирусную инфекцию и тепловой стресс. -Выявление прямого взаимодействия ядерных белков между собой. Научная новизна. Показано, что оздоровление растений Nicotiana tabacum и Nicotiana benthamiana от ВПТ на поздних сроках инфекции регулируется механизмом, зависимым от коилина, белка телец Кахаля (ТК). Коилин взаимодействует с вирусным белком 16К, перераспределяется из ТК в ядрышко, что приводит к индукции биосинтеза/накопления фитогормона салициловой кислоты (СК) в ответ на инфекцию ВПТ и вызывает активацию поздних стадий базового защитного ответа растения, зависимых от СК. Показано, что интерактивные ответы растений картофеля (Solanum tuberosum L.), контрастных по отношению к инфекции YВК и повышенной температуре существенно различаются уровнем экспрессии генов PR-белков, маркеров сигнального пути, регулируемого СК, и белков теплового шока. Фенотип растений восприимчивого сорта Чикаго меняется на резистентный при обработке СК, что сопровождается значительным увеличением экспрессии генов PR-белков и генов HSP. С использованием трансгенных растений картофеля с гиперэкспрессией генов коилина и фибрилларина показано, что эти ядерные белки являются негативными регуляторами защитного ответа на стресс. Негативный эффект гиперэкспрессии снимается при обработке трансгенных растений экзогенной СК. Ингибирование экспрессии фибрилларина и коилина в растениях картофеля по механизму РНК-интерференции приводит к молекулярным изменениям в сигнальных зависимых от СК защитных путях и усиливает защитную реакцию растения, приводя к формированию устойчивости растений картофеля к YВК. Продемонстрировано прямое взаимодействие между коилином и фибрилларином. Предполагается, что оба белка участвуют в общем сигнальном пути защитного ответа растения на биотический и абиотический стрессы, контролируемого в основном СК. Научная и практическая значимость. Полученные данные о роли ядерных белков коилина в фибрилларина в защитном ответе растений на вирусную инфекцию расширяют наши знания о механизмах взаимодействия растений и вирусов и неканонических функциях ядерных белков. Идентифицированные ядерные белки, контролирующие ответы на стресс биотической и абиотической природы, могут рассматриваться как перспективные мишени для селекционного процесса и создания с использованием технологий редактирования генов устойчивых сортов важных сельскохозяйственных культур (например, картофеля). Использованная в данной работе технология обработки растений дцРНК к гену интереса для подавления его экспрессии представляется перспективной для практического применения. Методология и методы исследования. Исследования выполнены с использованием современных методов молекулярной биологии, вирусологии, генной инженерии и клеточной биологии. Уровень экспрессии генов растений оценивали методом ПЦР в режиме реального времени. Для подавления экспрессии генов коилина и фибрилларина использовали метод вирус-индуцированного сайленсинга генов и новый метод обработки растений экзогенной дцРНК, комплементарной гену-интереса. Исследования релокализации белков в ядре изучали методом конфокальной лазерной сканирующей микроскопии. Для выявления белок-белковых взаимодействий был использован широкий спектр методов - дрожжевая двугибридная система, Фар-Вестерн блоттинг, ко-иммунопреципитация и бимолекулярная флуоресцентная комплементация. Работа выполнена с использованием современного оборудования.

# Название Размер