Диссертация

Объектом исследования являлся белок Nicotiana tabacum PBL (NtPBL), эволюционно родственный белку млекопитающих ВАР31. Целью работы была характеризация свойств и функций NtPBL. В исследовании применялись такие методы, как скрининг в дрожжевой двугибридной системе, клонирование последовательностей генов в составе различных векторов, транзиентная экспрессия в клетках растений с помощью агроинфильтрации, сайт-направленный мутагенез, транскрипция in vitro, экспрессия генов рекомбинантных белков в бактериальных клетках, анализ методом сдвига в агарозном геле, субклеточное фракционирование и иммунодетекция белков, биоинформатический анализ, поверхностный плазмонный резонанс, конфокальная лазерная сканирующая микроскопия. Получены следующие результаты: NtPBL структурно сходен с белком ВАР31 человека и является интегральным белком эндоплазматического ретикулума, содержит гидрофильный участок, способный к ди- и олигомеризации; обладает РНК-связывающими свойствами, в частности, высокой аффинностью к предшественникам микроРНК; картированы области белка, участвующие в этом связывании; охарактеризовано и подтверждено взаимодействие NtPBL с белком табака 4/1 in vitro и in vivo; установлено, что транзиентная экспрессия NtPBL влияет на фенотип вирусной инфекции в растениях и приводит к нарушениям развития. Работа вносит вклад в развитие фундаментальных представлений о роли белков растений в реализации регуляторных функций растительных микроРНК и может служить базой для дальнейших исследований в данной области.