Диссертация

Цель работы - исследование и оценка литическх свойств нативных и мутантных форм цитолитических ферментов бактериофага φKZ, активного против бактерии Рseudomonas aeruginosa. В данной работе, впервые проведен делеционный мутагенез ПГ181 из бактериофага φKZ. Получены и очищены 2 растворимых и активных пептидогликан лизирующих фермента, содержащих каталитический домен. Для них установлены оптимальные условия действия ферментов, их активность и термостабильность, а так же определена специфичность действия по отношению к различным видам бактерий. Методами точечного мутагенеза с последующим предсказанием изменений структуры методами молекулярной динамики, установлен точный механизм катализа. Впервые обнаружено наличие второго, дублирующего, активного центра у ПГ144 из бактериофага φKZ. Показано влияние второго, активирующего, аминокислотного остатка в активном центре фермента. Установленные границы функциональных доменов ПГ181 позволяют получить делеционные варианты этого белка, обладающих литической активностью против P. aeruginosa и отличающихся от нативного белка повышенной термостабильностью и активностью и могут быть использованы как перспективные кандидаты – энзибиотики для антимикробной терапии P. aeruginosa. Установление тонкой структуры активного центра ПГ144 и наличие у него дублирующего активного центра открывает путь к инжинирингу эндолизинов на основе этого белка.