Диссертация

Мембранные переносчики с широкой субстратной специфичностью - одна из систем защиты клетки от токсичных чужеродных соединений. Работа этих переносчиков снижает эффективность химиотерапии и антимикробных препаратов, а также приводит к появлению множественной лекарственной устойчивости (МЛУ) — резистентности клеток к широкому спектру соединений с разными физико-химическими свойствами. Принцип работы этой системы исследован на примере дрожжей. Связывание ксенобиотика с транскрипционными факторами Pdr1p/Pdr3p вызывает изменения их конформации и активируют экспрессию генов переносчиков с широкой субстратной специфичностью. Представляет интерес найти такие соединения, которые бы легко проникали в клетки грибов, но при этом не обнаруживались бы этой системой и не приводили к активации генов неспецифических переносчиков. В данной работе исследованы принципы регуляции множественной лекарственной устойчивости на примере клеток дрожжей, подвергнутых воздействию липофильных катионов. Мы показали, что в зависимости от времени воздействия данные соединения могут выступать как в роли индукторов, так и в роли конкурентных ингибиторов МЛУ-помп. Нами было показано, что ключевая роль в активации МЛУ липофильными катионами принадлежит транскрипционному фактору Pdr1p. Кроме того, был получен и охарактеризован штамм, в котором ген основного ATP/ADP-антипортера PET9 поставлен под регулируемый галактозный промотор. Было показано, что блокировка обмена адениновыми нуклеотидами между матриксом митохондрий и цитоплазмой, а также нарушение путей митохондриальной ретроградной сигнализации не препятствуют активации МЛУ под воздействием липофильных катионов. Добавление перекиси водорода в качестве прооксиданта способно дополнительно увеличить уровень активности МЛУ на фоне его индукции липофильными катионами. В свою очередь, добавление антиоксиданта SkQ1 снижает уровень активации МЛУ и увеличивает цитостатический эффект миконазола в штамме с делецией гена основного АВС-переносчика.