Диссертация

Лизостафин – один из перспективных антибактериальных лизинов, эффективный в отношении антибиотикоустойчивых штаммов Staphylococcus aureus. В данной работе был разработан метод определения каталитической активности лизостафина с использованием пептида пентаглицина в качестве субстрата и хромогенной реакции продуктов его гидролиза с нингидрином. Метод может быть использован для сравнения друг с другом уровней активности различных вариантов лизостафина, а также адаптирован для исследования других эндопептидаз со схожей специфичностью, и, таким образом, может быть полезен при разработке антибактериальных препаратов на основе лизинов. Также было впервые проведено систематическое исследование зависимости между каталитической, пептидогликанолитической и бактериолитической активностями рекомбинантного лизостафина при помощи замещения иона Zn2+ в его активном центре на ионы других металлов. Установленная линейная зависимость как пептидогликанолитической, так и бактериолитической активности лизостафина от его каталитической эффективности указывает на возможность улучшения антибактериальной активности лизостафина за счет повешения его каталитической эффективности. Кроме того при исследовании влияния металл-хелатных аффинных хроматографических сорбентов на активность рекомбинантного лизостафина показано падение уровня его активности в результате взаимодействия ионов Ni2+, адсорбированных на сорбенте, с активным центром лизостафина. Разработанные подходы к хроматографической очистке лизостафина и восстановлению его активности позволяют нивелировать этот эффект и могут быть использованы в целях стандартизации и производства высокоактивных препаратов лизостафина, а также для разработки новых поколений лекарственных средств против инфекционных заболеваний, вызванных S. aureus.