Диссертация

Целью работы было исследовать временное и пространственное распределение продуктов гена germes в овариальном фолликулогенезе X. laevis. Для этого сопоставлено содержание РНК и белка Germes в оогенезе и раннем развитии Xenopus laevis. С помощью метода in situ гибридизации и ПЦР-РВ показано, что транскрипт присутствует весь период оогенеза, а после развития количество быстро снижается и не детектируется на стадии нейрулы. Для определения содержания белка были получены и очищены из кроликов поликлональные антитела против белка Germes. С помощью вестерн-блоттинга и иммуногистохимии было определено, что белок также присутствует на всех стадиях оогенеза. А в развитии, в отличие от РНК, обнаруживается на всех исследованных стадиях, вплоть до головастика. Проведен структурный анализ последовательности РНК и белка Germes. В 3´НТО мРНК germes присутствуют мотивы локализации в митохондриальное облако и на вегетативный полюс ооцита. Белок Germes содержит мотивы лейциновых молний и миристоилирования, определяющие белок-белковые взаимодействия и примембранную локализацию. Также было впервые обнаружено наличие РНК и белка Germes в фолликулярных клетках ооцита. Путем ПЦР доказано, что продукты germes не поступают в фолликулярные клетки, а ген экспрессируется в соматических клетках. Исследована распространённость гена среди бесхвостых амфибий. Ген germes идентифицирован только у видов внутри семейства Pipidae у двух родов Xenopus и Hymenochirus, и уже не определяется в роде Pseudhymenochirus.