Диссертация

Цель работы заключалась в разработке новых высокочувствительных и высокоспецифичных методов количественного определения микроРНК с хемилюминесцентной детекцией, как безамплификационных, так и с применением амплификационной реакции каталитической сборки шпилек (КСШ). Разработан гомогенный метод определения микроРНК, основанный на аллостерической активации пероксидаза-подобного ДНКзима. Разработана и апробирована для количественного анализа микроРНК в лизатах культивируемых клеток человека стратегия гетерогенного определения микроРНК с использованием тройной амплификации, основанной на применении бесферментной амплификационной реакции КСШ с некомплементарным противостоянием нуклеотидов (нКСШ), конъюгата стрептавидин-полипероксидаза и усиленной хемилюминесценции. Показано влияние условий отжига шпилечных зондов метода нКСШ на интенсивность их фоновой реакции и, как следствие, аналитические параметры гетерогенного метода определения микроРНК, основанного на реакции нКСШ. Предложен и апробирован в анализе микроРНК новый бесферментный метод амплификации, названный КСШ с высвобождением олигонуклеотида.