Диссертация

Белок LPAP был открыт в 90-е, в комплексе с фосфатазой CD45. Известно, что данная тирозинфосфатаза очень важна для передачи Т-клеточного сигналинга от TCR. Кроме того, было показано, что белок LPAP ассоциирован с киназой Lck и ко-рецептором CD4. Несмотря на то, что изучаемый белок находится в непосредственной близости от таких важных в иммунном смысле молекул, его структура и функции до сих пор изучены очень слабо. С помощью моноклональных антител против белка LPAP выявлено 3 эпитопных области. В данной работе показано, что существует порядка 7 протеоформ белка, хотя ранее в литературе были описаны только 4 протеоформы. Фосфорилирование белка LPAP идет как минимум по 3-м сайтам: Ser-99, Ser-153 и Ser-172. Для последующего изучения белка были получены фосфоспецифические антитела против сайтов фосфорилирования белка LPAP. Данные антитела являются прекрасным средством для дальнейшего изучения поведения белка при активации, определения киназ и фосфатаз, взаимодействующих с LPAP. С помощью данных антител было показано, что при экспрессии в лимфоидных клетках фосфорилирование идет по всем трем сайтам, при этом фосфорилирование по Ser-153 является конститутивным, только как фосфорилирование по Ser-99 и Ser-172 исчезает при активации с помощью PMA. При экзогенной экспрессии LPAP в нелимфоидных клеточных линиях фосфорилирование по Ser-153 также присутствует, тогда как фосфорилирование по другим 2-м сайтам происходит не всегда. С помощью фосфоспецифических антител было показано, что белок LPAP фосфорилируется по Ser-153 протеинкиназой CK2.