Диссертация

Работа посвящена исследованию флуоресцентного белка SAASoti. Целью данной работы являлось получение мономерной формы флуоресцентного белка SAASoti и характеристика его физико-химических свойств для последующего применения в качестве уникального инструмента в методах супер-разрешающей флуоресцентной микроскопии. В результате работы, замена аминокислотных остатков лизина (K145) в зарядовом интерфейсе привела к получению стабильных тетрамеров, в то время как замена V127T в гидрофобном интерфейсе – к получению мономерной формы флуоресцентного белка SAASoti. При изучении кинетики фотоконверсии установили, что SAASoti превосходит коммерчески доступный фотоконвертируемый флуоресцентный белок Dendra2 по скорости фотоконверсии. Было обнаружено свойство обратимого фотопереключения из флуоресцентного состояния в темное для зеленой формы и частичного фотопереключения для красной формы. Продемонстрировано получение субдифракционного зображения в режиме фотоактивационной локализационной микроскопии (PALM) с использованием SAASoti в качестве флуоресцентной метки. Продемонстрирована возможность применения SAASoti в качестве донора флуоресценции во FRET-сенсоре(FRET - флуоресцентный резонансный перенос энергии) на каспазу-3 и измерение коэффициентов диффузии методом флуоресцентной корреляцонной спектроскопии (FCS) сенсора внутри клеток млекопитающих, во время протекания апоптоза и активации каспазы-3.